Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现口内自身HIV到再次出现1M-哮喘诊断副作用的成果率在儿童初期就有很好的揭示，多个口内自身HIV乙型肝炎的儿童中所有70%在血浆转换后10年内患上哮喘，而随访15年的儿童这一分之一减低到84%。值得注意，占诊断1M-哮喘一半以上的M-1M-哮喘的发病的系统还并未得到充分的研究课题。

日渐多的人开始用作依此系统来定义1M-哮喘的成果：母体在再次出现多种口内自身HIV时转到第1阶段，再次出现血糖持续性时转到第2阶段，再次出现副作用时转到第3阶段。一些多发口内自身HIV乙型肝炎的母体，在1期和2期，成果较迟，并发展为发病的1M-哮喘。我们以前揭示了都由在首次检测到多种口内自身HIV样品后将近10年无哮喘的很迟成果者，这组患儿人数不算，但特性更为明确。随后，我们注意到口内自身上皮细胞选择性CD8+T巨噬细胞反应会在成果比较迟的患儿中所理论上不存在，但在近期发病和长期存在的哮喘患儿中所很容易检测到。这可能说明了，与成果患儿相对于，这些患儿自身免疫反应会的通气减弱。

早期研究课题说明了，尽管通气性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但哮喘患儿存在一些系统缺陷，其中所有数对IL-2的反应会并能降低。此外，哮喘患儿中所的现像CD4+T巨噬细胞可能对通气更具抵抗性，展示出为现像T巨噬细胞的减缓减弱，连续性归因于的Treg和灌注归因于的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应会减弱。本研究课题的旨在是揭示了CD4+通气性T巨噬细胞(Treg)在一小群极比较迟成果者中所的特性，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

工具：BOX研究课题是一项以青年人为基础的纵向研究课题，在21岁下述复发的患儿亲属中所检查1M-哮喘的危险因素。我们以前揭示了长期比较迟成果者的特性，他们保持多重口内自身HIV乙型肝炎超过10年，但并未再次出现哮喘的诊断副作用，迟性或非受累自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量血液样品的比较迟成果者设为T和B巨噬细胞系统研究课题。在在此之前的研究课题中所，8名迟成果者(SP组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身HIV乙型肝炎。所有的发起者都正处于1M-哮喘成果的1期，尽管一些人随后失去了口内自身HIV对某些上皮细胞的乙型肝炎反应会，然而，一名患儿仍未正处于2期将近6年，但并未再次出现诊断副作用，一名患儿被检验为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据研究课题中所对该NAD展开了分开分析。分离出来外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，转用多参数流式巨噬细胞拳法和T巨噬细胞减缓试验分析NAD中所Treg的高频率、遗传和系统。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、连续性和重归)展开无行政官员聚类研究课题，分析Treg遗传。

结果：与身心健康NAD相对于，来自迟成果体的知觉CD4+T巨噬细胞的行政官员聚类说明了，激光阴的知觉CD4+ Treg高频率减低，与糖皮质激素诱导的TNFR涉及酶(GITR)暗示减低有关。一名HbA1c上升的患儿与成果比较迟者和匹配的对照组相对于，Treg对光有所多种不同。系统研究课题说明了，与身心健康NAD相对于，来自比较迟成果体的Treg介导的CD4+现像T巨噬细胞减缓值得注意受到破坏。展示出为对现像CD4+T巨噬细胞CD25和CD134暗示的减缓减低。

上图1 险恶的遗传研究课题说明了，CD4+Treg亚M-在迟成果字段中所减低。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NAD的光阴CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物暗示鉴别出10个元簇:知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)用作9个多种不同Treg标示转换成的10个元簇的MST。每个数据流代表一个战略性(100个战略性)，较小的元战略性(10个元战略性)在数据流组外围上色。每个数据流中所的粥上图透露单个标示的暗示最高级别。(b)每个元聚类的热上图，以说明了整体标示暗示。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)转换成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster木箱两条路线上图(原子量> 0.05%)确定为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T巨噬细胞(l)。橙色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 用作CITRUS的预测模M-确认，Treg高频率的减低是成果比较迟的标记。分级依赖型(a - f)和玉米研究课题(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的标志性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR暗示展开分离出来，建模FlowSOM族裔。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)组以及NADSP 606(橙色)中所CD25+ cd127的高频率简介上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的木箱两条路线上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，交叉明显的簇被识别为SP和HD字段之间的多种不同。(j)木箱两条路线上图说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起原子量(分之一)。(k)缩放说明了每个簇的遗传(粉红色)和Treg标示比起暗示与背景暗示(金色);上列，磁盘Treg_3;后面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中所标示的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验

上图3 与身心健康献血者相对于，成果比较迟者知觉treg的GITR减低。每个知觉CD4+T巨噬细胞元簇(知觉T巨噬细胞_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +知觉T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个暗示标示的转变。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的暗示热上图(sp606不有数在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR暗示串联，说明了缩放(c)和简介上图(d)。Wilcoxon相加表示法秩和检验，p< 0.07(橙色)所有NAD有数，p< 0.05(金色)NADSP 606和匹配的HD不有数在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)串联，说明了缩放(e)和简介上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加表示法秩检验

上图4 来自比较迟成果的CD4+ treg巨噬细胞控制现像CD4+T巨噬细胞的并能降低。SP组用金色的两条路线和边框透露，HD组用黑色的两条路线和边框透露，橙色的两条路线/边框透露NADsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按观察的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养出来3当晚展开流式巨噬细胞拳法检测。(a-d)与CD4+接收者者比起应的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。用作乙型肝炎对照(激光阴的响应巨噬细胞包含treg)测算减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 现像CD4+T巨噬细胞对比较迟成果的T巨噬细胞再生的减缓更引人注目。SP组用金色的两条路线和边框透露，HD组用黑色的两条路线和边框透露，橙色的两条路线/边框透露NADsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按观察的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，培养出来3当晚展开流式巨噬细胞拳法(CD25反染)和巨噬趋化因子研究课题。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培养出来。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究课题。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比较迟成果子的再生知觉CD4+Treg在GITR暗示中所得到了适配和充沛，忽略了进一步研究课题Treg在1M-哮喘可能性母体中所的一般而言的必要性。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28