Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩大

从第一次浮现人质内自身特异性到浮现1DF冠心病医学副作用的重大突破率在孩童时期就有良好的描述，多个人质内自身特异性无副作用的孩童中会有70%在血清转换后10在短期内患上冠心病，而随访15年的孩童这一%-增加到84%。来得之下，占医学1DF冠心病一半以上的DF1DF冠心病的得病机制还没有想得到前提的研究工作。

越来越多的人开始可用分期控制系统来定义1DF冠心病的重大突破：生殖在浮现多种人质内自身特异性时转至第1过渡期，浮现血糖异常时转至第2过渡期，浮现副作用时转至第3过渡期。一些多发人质内自身特异性无副作用的生殖，在1期和2期，重大突破速度快，并发展为得病的1DF冠心病。我们在此之前描述了一第三组在首次样品到多种人质内自身特异性抽样后大概10年无冠心病的极快重大突破者，这第三组病变人数少，但特征极其明确。随后，我们发现人质内自身肝细胞内特异性CD8+T细胞内反应会在重大突破缓快的病变中会基本不假定，但在近期得病和长期假定的冠心病病变中会很很难样品到。这有可能表明，与重大突破病变来得，这些病变血栓的调控减弱。

早期研究工作表明，尽管调控性T细胞内(Treg)数量正常，但冠心病病变假定一些功能缺陷，其中会包括对IL-2的反应会技能增加。此外，冠心病病变中会的振荡CD4+T细胞内有可能对调控更具抵抗性，体现为振荡T细胞内的抑止弱化，自然造成的Treg和质外造成的诱导Treg，以及肝细胞内个人经历的CD4+T细胞内中会IL-2反应会弱化。本研究工作的旨在是描述了CD4+调控性T细胞内(Treg)在一小群极缓快重大突破者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究工作是一项以人群为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病变亲属中会安全检查1DF冠心病的危险因素。我们在此之前描述了长期缓快重大突破者的特征，他们保持多重人质内自身特异性无副作用超过10年，但没有浮现冠心病的医学副作用，快性或非受虐血栓。随后，10名之后保持无冠心病并不愿提供大量尿液抽样的缓快重大突破者纳入T和B细胞内功能量化。在目前的研究工作中会，8名快重大突破者(SP第三组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的人质内自身特异性无副作用。所有的旁观者都受制于1DF冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了人质内自身特异性对某些肝细胞内的无副作用反应会，然而，一名病变早就受制于2期大概6年，但没有浮现医学副作用，一名病变被诊断为冠心病，该实验者72岁，在采自实验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中会对该遗传物质进行时了单独审计。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多数值流式细胞内忍术和T细胞内抑止试验性审计遗传物质中会Treg的阈值、表DF和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类核对、比如说和紧接)进行时无监督聚类量化，审计Treg表DF。

结果：与身心健康遗传物质来得，来自快重大突破质的清醒CD4+T细胞内的监督聚类辨识，触发的清醒CD4+ Treg阈值增加，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达增加有关。一名HbA1c升高的病变与重大突破缓快者和转换的对照第三组来得，Treg谱各有不同。功能量化表明，与身心健康遗传物质来得，来自缓快重大突破质的Treg介导的CD4+振荡T细胞内抑止微小受到影响。体现为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134传达的抑止增加。

上图1 险恶的表DF量化辨识，CD4+Treg亚DF在快重大突破描述符中会增加。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物传达核对出新10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;直通程Treg_1;直通程Treg_2;直通程Treg_3;和直通程Treg_4。(a)可用9个不同Treg标识降解的10个元簇的MST。每个路由器代表一个坦克部队(100个坦克部队)，相当大的元坦克部队(10个元坦克部队)在路由器第三组区域内上色。每个路由器中会的饼上图指出新单个标识的传达级别。(b)每个元聚类的热上图，以辨识整质标识传达。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)降解上图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说核素为每个metacluster箱直通上图(核素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:直通程Treg_2 (e),直通程Treg_3 (f),直通程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。蓝色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 可用CITRUS的预测模DF推测，Treg阈值的增加是重大突破缓快的标志。评定相关联(a - f)和甜菜量化(g-k)比较SP旁观者和转换的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞内上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时分离，模拟FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及遗传物质SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的阈值统计上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+相关联子集的箱直通上图;(c) HLA-DRloGITR−(直通程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(直通程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(直通程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+直通程T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达高强度后处理，箭头突出新的簇被比对为SP和HD描述符之间的不同。(j)箱直通上图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中会，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说核素(%-)。(k)缩放辨识每个簇的表DF(粉红色)和Treg标识一般来说传达与着重传达(蓝色);上列，直通程Treg_3;下面悄悄，直通程Treg_4。着重与所有其他簇中会标识的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

上图3 与身心健康献血者来得，重大突破缓快者清醒treg的GITR增加。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;直通程Treg_2;直通程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个传达标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的传达热上图(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，辨识缩放(c)和统计上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(蓝色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和转换的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从评定相关联，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，辨识缩放(e)和统计上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

上图4 来自缓快重大突破的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的技能增加。SP第三组用蓝色的直通和白点指出新，HD第三组用灰色的直通和白点指出新，蓝色的直通/白点指出新遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标识为CFSE, Treg按判读的%-试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培育3天内进行时流式细胞内忍术样品。(a-d)与CD4+反之亦然者一般来说应的treg培育(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比率。可用无副作用对照(触发的响应细胞内不含treg)计算出来抑止比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 振荡CD4+T细胞内对缓快重大突破的T细胞内酪氨酸的抑止更恰当。SP第三组用蓝色的直通和白点指出新，HD第三组用灰色的直通和白点指出新，蓝色的直通/白点指出新遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内进行时分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标识，treg按判读的%-试样。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培育3天内进行时流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止花红(b)。(c,d) CD25抑止花红(c)和CD134抑止花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们断定的结论是，来自缓快重大突破子的酪氨酸清醒CD4+Treg在GITR传达中会想得到了扩展和丰富，强调了实质性研究工作Treg在1DF冠心病风险生殖中会的比如说的必要性。

中文翻译典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28